Browsing by Author "CANTEKİN, Zafer (Araştırma Sorumlusu)"

Now showing 1 - 1 of 1
  • No Thumbnail Available
    Item
    Mastitisli sütlerden izole edilen bakterilerin virulens faktörlerinin konvansiyel ve moleküler yöntemlerle saptanması
    (2008) AKAN, Mehmet; Veteriner Fakültesi; İZGÜR, Müjgan (Araştırma Sorumlusu); CANTEKİN, Zafer (Araştırma Sorumlusu); TOSUN, Gökçen (Araştırma Sorumlusu); ÇETİN, Seyda (Araştırma Sorumlusu)
    Çalışma kapsamında incelenen 1135 adet süt örneğinden 178 (%15.7) Staphylococcus spp, 99 (8.7%) E.coli ve 65 (%7.7) Streptococcus spp. izole edildi. Stafilokok suşlarının 126 (%70.8)’sı S.aureus olarak identifiye edildi. İzole edilen 65 adet Streptokok suşunun 35 (%53.9)’i S.uberis, 16 (%24.6)’sı S.agalactiae ve 14 (%21.5)’ü S.dysgalactiae olarak ayrıldı.İncelenen 178 stafilokok suşunun 126 (%70.8)’si koagülaz, 122 (%68.5)’si clumping faktör, 133 (%74.7)’ü hemoliz, 121 (%68)’i DNaz, 68 (%38.2)’i hemaglütinasyon ve 154 (86.5)’ü slime faktör yönünden pozitif bulundu. İzole edilen 99 E.coli suşunun 10 (%10.1)’u hemoliz ve 4 (%4)’ü MSHA yönünden pozitif olduğu saptandı. Hemoliz özelliği yönünden test edilen 65 suşun 43 (%66.1)’ü alfa hemolitik, 12 (18.5)’si beta hemolitik ve 10 (%15.4)’u gama hemolitik olarak belirlendi. Antibiyotik duyarlılık testleri sonucunda, Staphylococcus spp. suşlarında, incelenen 178 suşun 108 (%60.1)’i amoksisiline, 153 (%86)’ü amoksisilin+klavulonik asite, 76 (%42.7)’sı ampisiline, 108 (%60.1)’i ampisilin+sulbaktama, 86 (%48.3)’ü eritromisine, 148 (%83.1)’i kloksasiline, 88 (%49.4)’i oksitetrasikline, 131 (%73.6)’i sefoperazona, 128 (%72)’i trimethoprime, 152 (%85.4)’ü trimethoprime+sülfametoksazol duyarlı bulundu. İncelenen 178 suşun 160 (%89.9)’ı metisiline duyarlı bulundu. İzole edilen 99 E.coli suşunun 74 (%74.7)’ü amoksisiline, 82 (%82.8)’si amoksisilin+klavulonik asite, 70 (%70.7)’i ampisiline, 75 (%75.8)’i ampisilin+sulbaktama, 71 (%71.7)’i oksitetrasikline ve 81 (%81.8)’i trimethoprime+sülfametoksazol duyarlı bulundu. İncelenen 65 Streptococcus spp. suşunun 58 (%89.2)’i amoksisiline, 62 (%95.4)’si amoksisilin+klavulonik asite, 59 (%90.8)’u ampisiline, 61 (%93.8)’i ampisilin+sulbaktama, 52 (%80)’si eritromisine, 60 (%92.3)’ı kloksasiline, 48 (%73.8)’i oksitetrasikline 59 (%90.8)’u trimethoprime+sulfametoksazol duyarlı bulundu.Suşların moleküler tekniklerle cins ve tür düzeyinde (S.aureus) identifikasyonu için yapılan 16S-23S rRNA PCR ve multipleks PCR (femA)’da, konvansiyonel olarak S.aureus olarak identifiye edilen tüm suşlar pozitif bant verdi. Ayrca 16S rDNA spesifik primerlerle yapılan multipleks PCR ile Stafilokok suşlarının cins düzeyinde moleküler doğrulaması gerçekleştirildi. Suşların metisilin direnci mecA multipleks PCR ile moleküler olarak gerçekleştirildi ve sonuçlar antibiyotik duyarlılık test sonuçları ile uyumlu bulundu. İzole edilen suşların moleküler tiplendirilmesi amacıyla RAPD-PCR ve PCR-RFLP teknikleri kullanıldı. Bu çalışmalar sonrasında suşlar farklı gruplara ayrıldı ve aynı işletmelerden izole edilen suşlar, işletme düzeyinde benzer bant profilleri gösterdikleri belirlendi.Sonuç olarak, bu çalışma ile moleküler yöntemlerin stafilokokların identifikasyonunda, virulens özelliklerinin belirlenmesinde ve genotiplendirilmesinde kullanılabileceği ortaya kondu. Summary(In the study, Staphylococcus spp, E.coli and Streptococcus spp. were isolated from 178 (15.7%), 99 (8.7%) and 65 (7.7%) of 1135 milk samples, respectively. Amongst Staphyloccus spp. isolates 126 (70.8%) were identified as S.aureus. The most commonly identified streptococcal species were Streptococcus uberis, Streptococcus agalactiae, and Streptococcus dysgalactiae which were detected in 35 (53.9%), 16 (24.6%), and 14 (21.5%) of 65 strains, respectively.In the study, 126 (70.8%) and 122 (68.5%) out of 178 strains were identified as coagulase positive and clumping factor positive, respectively. One hundred and thirty three (74.7%) out of 178 strains were determined to show haemolysis, and 121 (68%) were determined as DNase positive. In the haemagglutination tests 68 (38.2%) strains were detected to haemagglutinate the erythrocytes and 154 (86.5%) out of 178 strains were detected to be positive slime factor. Ten (10.1%) strains out of E.coli strains were determined to show haemolysis, and 4 (4%) were found as MSHA. In the haemolytic activity tests 43 (66.1%), 12 (18.5%) and 10 (15.4%) out of 65 Streptococcus spp. strains were determined to show alpha haemolytic, beta haemolytic and gamma haemolytic, respectively. Following the antibiotic resistance tests, susceptibilities to antibiotics for Staphylococcus spp. were as follows: 108 (60.1%) to amoxycillin, 153 (86%) to amoxicillin+clavulonic acid, 76 (42.7%) to ampicillin, 108 (60.1%) to ampicillin+sulbactam, 86 (48.7%) erythromicin, 148 (83.1%) to cloxacillin, 88 (49.4%) to oxytetracyclin, 131 (73.6%) to cephaperazone, 128 (72%) to trimethoprim and 152 (85.4%) to trimethoprim+sulphamethoxazole. 160 (89.9%) out of 178 strains were detected to be sensitive to methicilline. Sensitivities of E.coli strains against amoxycillin, amoxycillin+clavulonic acid, ampicillin, ampicillin+sulbactam, oxytetracyclin and trimethoprim+sulphamethoxazole were found to be 74 (%74.7), 82 (%82.8), 70 (%70.7), 75 (%75.8), 71 (%71.7) and 81 (%81.8), respectively. Susceptibilities to antibiotics for streptococci were as follows: 58 (%89.2) to amoxicillin, 62 (%95.4) to amoxicillin+clavulonic asid, 59 (%90.8) to ampicillin, 61 (%93.8) to ampicillin+sulbactam, 52 (%80) to eritromycin, 60 (%92.3) to cloxacillin, 48 (%73.8) to oxytetracyclin 59 (%90.8) to trimethoprim+sulphamethoxazole.All strains identified as S.aureus in conventional tests gave positive bands in the molecular techniques such as 16S-23S rRNA PCR and multiplex PCR (detection of femA gene) respectively used for genus and species specific identification of staphylococci. Also these strains were confirmed to belong to Staphylococcus genus following multiplex PCR tests using 16SrDNA primers specific to staphylococci. Methicillin resistance were detected with mecA multiplex PCR and the results were in concordance with the antibiotic susceptibility tests. For the molecular characterization of the strains, RAPD-PCR and PCR-RFLP analysis with different enzymes following specific amplification of the gene sequences were performed. Strains were classified into different groups following these studies and identical band patterns were detected in the same facilities.As a conclusion, this study showed that molecular techniques could be used for identification of staphylococci, determination of virulence characteristics and genotyping of strains, as well)